干货分享| 广谱核酸酶的使用，你学会了吗？

广谱核酸酶，又称全能核酸酶，是一种源于粘质沙氏菌（Serratia marcescens，又称灵杆菌）的非特异性核酸内切酶。在功能上，它能够剪切各种形式DNA和RNA，无论是单链、双链、线状、环状或超螺旋形式的DNA和RNA，切断磷酸二酯键从而产生5’-磷酸核苷酸或5’-磷酸寡核苷酸。在之前的一期中，就有详细介绍过广谱核酸酶，有兴趣的小伙伴不妨翻阅下之前的文章进行浏览~

本次，我们将为大家带来一些广谱核酸酶使用上的注意事项，让其在实际应用过程中发挥作用吧。

1. 使用过程中，如何保持适合酶活力？

答：pH和温度控制很重要，适宜pH在8.0，不过6-10之间也可使用，适宜活性温度是37℃，酶活性温度范围0~42°C。

2. 关于存放问题，如果临时使用会不会影响后期？

答：金普诺安广谱核酸酶分固体与液体2款：冻干类产品非常稳定，收到货后于4°C干燥环境内储存，有效期可放置3年，液体有效期为1年，打开包装使用后，如果在 2～8oC 环境下放置超过1周时间，建议过滤除菌，防止微生物污染。

3. 样品中含有EDTA，盐酸胍等成分，我们需要注意什么？

答：以下常用试剂对广谱核酸酶的活性有抑制作用，反应条件不适合容易加长反应时间，影响实验进度，在下列浓度范围内，即可控制广谱核酸酶活性损失在50%以内：

4. 不同应用途径中应该添加多少广谱核酸酶比较合适呢？

答：具体的核酸酶添加量会根据不同的实验用途而有所不同，以下是一些简单参考，具体操作和数据调整还需要经过实验验证：

真核细胞裂解液：为了降低细胞裂解液黏度，缩短处理时间，改善分离效果，可以参考细胞数来添加。比如一般为10⁶-10⁷个细胞添加1μl即500单位的核酸酶。

纯化后的疫苗病毒：由于DNA含量较少，可以按照万分之一到万分之五也就是每毫升5个单位的最终浓度加入。

5. 哪些缓冲液可以用于稀释？

答：稀释液缓冲液: 20 mM Tris-HCl（pH 8.0），2 mM MgCl₂，20 mM NaCl。不需要无菌的可以直接加入，若有无菌要求，建议将酶用buffer稀释，然后用0.2μm的膜除菌过滤后加入。酶被稀释后尽快用掉，避免反复冻融。

6. 倘若反应温度无法达到适配温度37℃，如何保证核酸酶消化效果？

答：当反应温度过低的情况下，推荐延长反应时间来保证消化效果。

7. 实验过程中遇到需要蛋白变性环境，对核酸酶是否有影响？

答：在问题三中已列举出如SDS、尿素等试剂都会影响到核酸酶的酶活影响，随着浓度与时间的增加，核酸酶会出现变性失活，可通过控制抑制剂浓度范围及提高核酸酶浓度来补偿抑制因素影响。

8. 核酸酶的使用时间？

答：可以选择在细胞收获前、澄清后或是纯化后用广谱核酸酶处理样品，一般选择在收获前或澄清后处理，可以提高病毒得率。

早期使用：可以减少大的DNA片段，并且可以在下游纯化步骤中去除残留的核酸酶。 但为了去除样品中大量的核酸，必须使用大量的酶。

后期使用：节约了核酸酶的用量，降低成本；但必须增加一个去除广谱核酸酶残留的步骤，并且，采用这种方式可能会导致病毒的得率减少。

【金普诺安|广谱核酸酶】

√ 高度稳定性

√ 比活性大于 1000 kU/mg 蛋白

√ 无动物源性成分

√ 避免原核细胞的内毒素污染

√ 不含蛋白酶残留

√ 供应稳定，到货快

广谱核酸酶的活性受离子浓度、反应温度及pH等因素的影响，初次使用时建议摸索适配浓度。同时，为了您的安全和健康，使用时请穿好实验服，佩戴好防护手套等进行操作。